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產(chǎn)品分類：

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Y1HGold Chemically Competent Cell

產(chǎn)品貨號：CC96402

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul

產(chǎn)品價格： ￥電議

點(diǎn)擊次數(shù)：1211

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標(biāo)簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡介

Y1HGold 菌株是 Clontech 公司開發(fā)的 GAL4-AbA 酵母單雜系統(tǒng)用菌株，MATα 型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)

粒進(jìn)行篩庫試驗。Transformation marker 為：ura3，leu2；報告基因為：AbAr。Y1HGold-GAL4-

AbA 酵母單雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：pAbAi 和 pGADT7。質(zhì)粒 pAbAi 的篩選標(biāo)志為 URA，

用于表達(dá) pBait-AbAi construct (1~3 個 bait DNA 序列重復(fù)串聯(lián)后克隆到 pAbAi 中)；質(zhì)粒 pGADT7

的篩選標(biāo)志為 LEU，用于表達(dá) AD(GAL4 C 端 768 ~ 881 位氨基酸)與目標(biāo)蛋白 (Prey)的融合蛋白。

GAL4-AbA 酵母單雜系統(tǒng)原理：Aureobasidin A (AbA)是一種環(huán)酯肽抗生素，在低濃度 (0.1-0.2

µg/ml)下即可對酵母產(chǎn)生毒性�；蚪M中整合了 pBait-AbAi 的酵母菌株 (Bait-Reporter Yeast Strains)，

當(dāng)獵物蛋白 (Prey)結(jié)合到誘餌序列 (Bait DNA)上，GAL4 AD 就會激活 AbAr 的表達(dá)，從而能夠在含

有抗生素 AbA 的培養(yǎng)基上生長。AbAr 與營養(yǎng)缺陷報告基因相比具有更低背景的優(yōu)點(diǎn)，可以降低酵

母單雜假陽性發(fā)生的概率。Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，-80℃可保存三個月，pGADT7

質(zhì) 粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組分

名稱

規(guī)格

儲存方式

Y1HGold Competent Cell

100 μl /支

-80℃（3 個月）

pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)

10 μl

-80℃（12 個月）

Carrier DNA (10 μg/μl)

100 μl

-20℃（12 個月）

PEG/LiAC

5 ml

4℃（12 個月）

基因型： MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1

使用方法：

● 操作方法

1. 取 100 µl 冰上融化的 Y1HGold 感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒 2-5 µg，Carrier DNA(95-

100℃， 5min，快速冰浴，重復(fù)一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl 并吸打幾次混勻，30℃水浴 30 min

(15 min 時翻轉(zhuǎn) 6-8 次混勻)。

2. 42℃水浴 15 min (7.5 min 時翻轉(zhuǎn) 6 - 8 次混勻)。

3. 5000 rpm 離心 40 s 棄上清，ddH2O 400 µl 重懸，離心 30 s 棄上清。

4. ddH2O 50 µl 重懸，涂板，29℃培養(yǎng) 48 - 96 h。

● 培養(yǎng)基配制

① YPDA (1L): Tryptone 20 g ，Yeast extract 10 g ，0.2% adenine 15 ml 補(bǔ)水到 950 ml，用鹽酸調(diào)

pH 到 6.5； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高壓滅菌；待培養(yǎng)基溫度降到 55℃時，加入

已過濾的 40% 葡萄糖 50 ml。

② SD medium (1L): Yeast Nitrogen base 6.7 g ，葡萄糖 20 g ，Dropout 適量（按說明書）補(bǔ)水到 1L，

調(diào) pH 至 5.8； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高壓滅菌。

③ 0.2% adenine (1L): Adenine 2 g,，補(bǔ)水到 1L；溶解后高壓滅菌或 0.22 µm 濾膜過濾除菌。

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�？上鄳�(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3. 同時轉(zhuǎn)化 2 - 3 種質(zhì)粒時可增加質(zhì)粒的用量。

4. Y1HGold 酵母菌株對高溫敏感，最適生長溫度為 27 - 30℃；高于 31℃，生長速度和轉(zhuǎn)化效率呈

指數(shù)下降。

5. 菌落變粉不是污染，是酵母細(xì)胞生長中一個常見現(xiàn)象。當(dāng)細(xì)胞在平板培養(yǎng)幾天后，平板上的

Adenine 被酵母消耗完畢，酵母試圖通過自身代謝途徑合成 Adenine 以供利用，然而，有些菌株的

ADE2 基因被破壞，Adenine 合成途徑受阻；又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常，所以造成中間產(chǎn)

物 P-ribosylamino imidazole (AIR) 在細(xì)胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色。

6. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比 YPDA 培養(yǎng)基慢，培養(yǎng)基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂

板為例：涂 YPDA 平板 29℃，48 h 培養(yǎng)可見直徑 1 mm 克��；涂 SD 單缺平板 29℃，48 - 60 h 培養(yǎng)

可見直徑 1 mm 克隆，涂 SD 雙缺平板 29℃，60 - 80 h 培養(yǎng)可見直徑 1 mm 克隆，涂 SD 三缺或四缺

平板平板 29℃，80 - 90h 培養(yǎng)可見直徑 1 mm 克隆

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司

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