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產(chǎn)品分類：

Nexell細(xì)胞系/株 Nexell原代細(xì)胞 Nexell細(xì)胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細(xì)胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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EHA101感受態(tài)（電轉(zhuǎn)）

產(chǎn)品貨號：EC96306

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul

產(chǎn)品價格： ￥電議

點(diǎn)擊次數(shù)：1073

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標(biāo)簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡介

EHA101

菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽

——利福平抗性基因Rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，

此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型

Ti 質(zhì)粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir 基

因 (vir 基因是

T-DNA 插入植物基因組必需的元件，

pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T

DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體

T-DNA 順利轉(zhuǎn)移)。pEHA101 (pTiBo542DT

DNA)

型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：

Kan，賦予 EHA101 菌株卡那霉素抗性，適用于玉米、水稻、煙草

等植物的轉(zhuǎn)基因操作。

本公司

開發(fā)的 EHA101 電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng) pK7WGF2

質(zhì)粒

(壯觀霉素抗性，

size:11876 bp)檢測轉(zhuǎn)化效率>105cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

EHA101

電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10 × 50μL

100 × 50μL

定制

基因型：C58

(RifR ) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (KanR ) Nopaline

存儲條件

-80 ℃

保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA101 外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率

≥105cfu/μg

DNA。

使用方法

1. 將新的

2 mm 電擊杯插入冰中預(yù)冷；或者將儲存于

75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工

作臺中將其倒

置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，

然后插入冰中預(yù)冷；

2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入

0.01-1 μg質(zhì)粒 DNA（體積不大于 5 μl），用 200

μl 槍頭將感受態(tài)-質(zhì)�；旌衔锟焖俎D(zhuǎn)移到預(yù)冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；

3. 開啟電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)（2500 V ，200 Ω，25 μF），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成后快速插

入冰中，加入 900 μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。

（注：此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進(jìn)行操作）

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平

板上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天（當(dāng)平板只含有轉(zhuǎn)化所用雙元載體抗生素時，28℃培養(yǎng) 48 小時

即可；平板中同時加入雙元載體抗生素，20μg/ml Rif 時，需 28℃培養(yǎng) 60h；如果使用的平板含有 50

μg/ml rif 則需要 28℃培養(yǎng) 72-90 小時）。

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；

3. 利福平濃度不應(yīng)高于 25 μg /μl，利福平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。

4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添加。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司

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