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當(dāng)前位置：首頁 - 產(chǎn)品中心 - 感受態(tài) - 根癌農(nóng)桿菌感受態(tài) -EHA101感受態(tài)

產(chǎn)品分類：

Nexell細(xì)胞系/株 Nexell原代細(xì)胞 Nexell細(xì)胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細(xì)胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

產(chǎn)品展示

PRODUCT SHOW

相關(guān)產(chǎn)品

EHA101感受態(tài)

產(chǎn)品貨號：CC96306

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul

產(chǎn)品價(jià)格： ￥電議

點(diǎn)擊次數(shù)：1321

在線詢價(jià)

標(biāo)簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡介

EHA101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因Rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，

此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir 基

因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T

DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA 順利轉(zhuǎn)移)。pEHA101 (pTiBo542DT

DNA) 型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：Kan，賦予 EHA101 菌株和卡那霉素抗性，適用于玉米、水稻、煙

草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的 EHA101 化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pK7WGF2

質(zhì)粒（壯觀霉素抗性）檢測轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

EHA101

化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：C58 (RifR) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (KanR) Nopaline

存儲條件

-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA101 外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μl 感受態(tài)細(xì)胞中，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分

鐘（或干冰乙醇浴和-80℃冰凍）、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘；

3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基，于 28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)；

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板

上，倒置放于28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天（當(dāng)平板只含有轉(zhuǎn)化所用雙元載體抗生素時(shí)，28 ℃培養(yǎng)48 h即可；

平板中同時(shí)加入雙元載體抗生素，20 μg/ml Rif 時(shí)，需 28℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif

則需要 28℃培養(yǎng) 72-90 h）。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；

3. 利福平濃度不應(yīng)高于 25 μg/μl，利福平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。

4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添加。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司

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