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產(chǎn)品分類：

Nexell細(xì)胞系/株 Nexell原代細(xì)胞 Nexell細(xì)胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細(xì)胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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ClearColi K12電轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)

產(chǎn)品貨號：EC96194

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul

產(chǎn)品價格： ￥電議

點(diǎn)擊次數(shù)：1293

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標(biāo)簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡介

ClearColi K12 感受態(tài)細(xì)胞用電擊法轉(zhuǎn)化的效率較高，故不推薦使用熱激法化學(xué)轉(zhuǎn)化。ClearColi K12

菌株來源于 K12 endArecA-菌株，并在其中引入突變，導(dǎo)致 ClearColi K12 細(xì)胞壁外層的脂多糖被修

飾（LPS 的低聚糖鏈被刪除，同時 LPS 的兩個�；溡脖粍h除），進(jìn)而破壞了 ClearColi K12 大腸

桿菌的內(nèi)毒素信號通路，使得從該細(xì)胞中提取的蛋白或質(zhì)粒 DNA 中的內(nèi)毒素含量極低，提取的無

內(nèi)毒素質(zhì)粒廣泛應(yīng)用于后續(xù)的哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)化。ClearColi K12 同時缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)和重組

酶 (recA)，提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量。吐露港生物開發(fā)的 ClearColi K12 電擊感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特

殊工藝制作，pUC18 質(zhì)粒檢測的電轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

ClearColi K12

電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞

10 × 50 μL

100 × 50 μL

定制

基因型：F- λ- ∆endA ∆recA frr181 msbA52 ∆gutQ ∆kdsD ∆lpxL ∆lpxM ∆pagP ∆lpxP ∆eptA

存儲條件

-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

電轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，轉(zhuǎn)入冰上預(yù)冷的電擊轉(zhuǎn)化杯中；

3. 使用電轉(zhuǎn)儀進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)化（轉(zhuǎn)化參數(shù)為：2 mm 電擊杯，2.5 kv，200 Ω，電轉(zhuǎn)化時間一般為 4-5

ms 左右）；

4. 電擊后迅速取出電擊杯，向其中加入 900 μL 液體 LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后

置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；

5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰上解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 不應(yīng)含有較高的離子強(qiáng)度，建議總體積不超過 5 μl，一般為 1-2 μl；

3. 為確保最高轉(zhuǎn)化效率，電轉(zhuǎn)化杯一定要在冰上預(yù)冷；

4. 如使用 1 mm 電擊杯，則轉(zhuǎn)化參數(shù)改為 1.25 kv 和 200 Ω。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司

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