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Tuner感受態(tài)

產(chǎn)品貨號(hào):CC96141

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Tuner 系列菌株是 lacZY 刪除的 BL21 突變菌株,其中 lacY 的突變使得 IPTG 能夠進(jìn)入所有細(xì)胞的胞
內(nèi),從而使得蛋白的誘導(dǎo)水平具有 IPTG 的濃度依賴(lài)性。當(dāng)與 pET 系列載體聯(lián)合使用時(shí),可使蛋白
的表達(dá)量從低表達(dá)水平到超高表達(dá)水平的范圍內(nèi)進(jìn)行有效的調(diào)節(jié);而在蛋白表達(dá)水平低的情況下,
目的蛋白可能會(huì)呈現(xiàn)更好的可溶性和活性。因此,Tuner系列菌株的蛋白表達(dá)水平可以通過(guò)IPTG
度來(lái)進(jìn)行精確而嚴(yán)謹(jǐn)?shù)恼{(diào)控。此外,Tuner 系列菌株還是 Lon OmpT 蛋白酶缺陷型菌株。由于該
菌株不含有 λDE3序列,不表達(dá) T7 RNA 聚合酶,因此不能用于 T7啟動(dòng)子系列質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。經(jīng)
pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測(cè),Tuner 感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108 cfu/μg DNA
產(chǎn)品組成
組分
Tuner
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm lacY1
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存;請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動(dòng),熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;
4. 向離心管中加入 900 μL LB SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預(yù)熱),后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min;
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10;
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保最高轉(zhuǎn)化效率,整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

原創(chuàng)作者:上海語(yǔ)純生物科技有限公司

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