細胞鑒定：種屬鑒定已通過  

細胞來源 ：國家資源庫  

細胞背景：紡錘形和上皮樣細胞的混合物

https://www.atcc.org/products/crl-6475

細胞特性 

1） 來源：小鼠黑色素瘤

2） 形態(tài)：上皮細胞樣 貼壁生長

3） 含量：>1x106 細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用

培養(yǎng)條件 

1） 準備 DMEM(含 NaHCO3 1.5g / L）

添加 NaHCO3 1.5g/L）89 %，優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10 %，P/S 雙抗 1%2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度

為 70%-80%。

注意事項

該細胞在 DMEM(含 1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好，大部分品牌的 DMEM 含有較高

濃度的 NaHCO3（3.7g/L），若使用 DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞時需要提

高 CO2 濃度（7%-10%）。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1-2mL，

T75 瓶 2-3mL），

置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯

微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)

瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液

后吹勻。將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置

的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:5 的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

運輸形式 

低溫：（1）1mL 凍存管包裝干冰運輸，收到后-80 度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接

復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立

即與我們聯(lián)系。

常溫: （2） T25 瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注

意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸

沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或

用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司