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當(dāng)前位置：首頁(yè) - 產(chǎn)品中心 - 感受態(tài) - 克隆感受態(tài) -DH10B plus

產(chǎn)品分類：

Nexell細(xì)胞系/株 Nexell原代細(xì)胞 Nexell細(xì)胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細(xì)胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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DH10B plus

產(chǎn)品貨號(hào)：CC96193

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul

產(chǎn)品價(jià)格： ￥電議

點(diǎn)擊次數(shù)：1364

在線詢價(jià)

標(biāo)簽：感受態(tài)

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DH10B-Plus 感受態(tài)細(xì)胞用電擊法轉(zhuǎn)化的效率較高，故不推薦使用熱激法化學(xué)轉(zhuǎn)化。DH10B-Plus 菌

株來(lái)源于 DH10B 菌株，在 DH10B 菌株中引入 Hte 突變，提高了細(xì)胞膜的通透性和對(duì)瞬時(shí)高壓的耐

受進(jìn)而提高了電擊轉(zhuǎn)化效率。DH10B-Plus 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA

(無(wú)論真核生物還是原核生物的基因組 DNA 都能被高效的轉(zhuǎn)入 DH10B-Plus 中)。recA1 和 endA1 的

突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取， lacZΔM15 標(biāo)記的存在使 DH10B-Plus 可

用于藍(lán)白斑篩選。DH10B-Plus 電擊感受態(tài)細(xì)胞具有鏈霉素和四環(huán)素抗性，適用于大質(zhì)粒的構(gòu)建或

各種文庫(kù)構(gòu)建，經(jīng)特殊工藝處理，pUC18 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 1010 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

DH10B-plus 感受態(tài)細(xì)胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697

galE15 galK λ- rpsL nupG Hte (TetR)

存儲(chǔ)條件

-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥1010 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，轉(zhuǎn)入冰上預(yù)冷的電擊轉(zhuǎn)化杯中；

3. 使用電轉(zhuǎn)儀進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)化（轉(zhuǎn)化參數(shù)為：2mm 電擊杯，2.5kv，200Ω，電轉(zhuǎn)化時(shí)間一般為 4-5 ms

左右）；

4. 電擊后迅速取出電擊杯，向其中加入 900 μL 液體 LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后

置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；

5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰上解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 不應(yīng)含有較高的離子強(qiáng)度，建議總體積不超過(guò) 5 μl，一般為 1-2 μl；

3. 為確保最高轉(zhuǎn)化效率，電轉(zhuǎn)化杯一定要在冰上預(yù)冷；

4. 如使用 1 mm 電擊杯，則轉(zhuǎn)化參數(shù)改為 1.25 kv 和 200 Ω。

原創(chuàng)作者：上海語(yǔ)純生物科技有限公司

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