英文名稱：D-Luciferin, potassium salt
CAS：115144-35-9
分子式：C11H7N2KO3S2
分子量：318.41
外觀：黃色粉末。
純度：≥ 99% (HPLC)
Ex (nm) ：328
Em (nm)：533
溶劑：Water
保存條件：-20℃干燥避光保存，有效期二年。
  D-蟲熒光素(D-Luciferin)是螢火蟲熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。反應(yīng)原理：首先，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng)，接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測(cè)�？膳c小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)配套使用，用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)活體熒光檢測(cè)。

1、D-熒光素適合做哪些實(shí)驗(yàn)?

D-熒光素鉀鹽和5-氟-熒光素，作為Luciferase的作用底物，常用于以下實(shí)驗(yàn)：

    1. 報(bào)告基因分析

    2. In vivo imaging (動(dòng)物活體成像)

    3. In vitro imaging (細(xì)胞體外分析)

    4. ATP測(cè)定

    5. 其它luciferase及其基因相關(guān)的分析和研究工作

2、D-熒光素應(yīng)用于活體成像的基本原理

細(xì)胞中D-熒光素酶參與的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)遵守酶促反應(yīng)的基本原理，在底物D-熒光素鉀過量的情況下，反應(yīng)產(chǎn)生的光子數(shù)（發(fā)光量）與細(xì)胞中的D-熒光素酶的量成正相關(guān)，從而可以推算出細(xì)胞的數(shù)量。

3、D-熒光素鉀鹽溶液的穩(wěn)定性

D-熒光素鉀鹽易溶于水和緩沖液，溶解度可高達(dá)25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。

溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時(shí)間對(duì)其保存過程中的穩(wěn)定性非常重要。當(dāng)溶液的pH<6.5（發(fā)生水解作用）或>7.5（發(fā)生消旋化作用，D型轉(zhuǎn)化為L型）的情況下，D-熒光素鉀鹽相對(duì)不穩(wěn)定。如果溶液中存在少量的氧氣，將加速D-熒光素鉀的降解速度。

D-熒光素配成溶液后，在的保存條件（-80°C，pH，無氧氣）下，存在固定的降解速度：0.2%/天，因此配成溶液保存的D-熒光素應(yīng)盡量在1年內(nèi)使用完。

有水存在的情況下，主要發(fā)生消旋化作用，即D-熒光素轉(zhuǎn)化成L-熒光素，有報(bào)道稱L-熒光素對(duì)熒光素酶催化的酶促反應(yīng)有抑制作用。

4、D-熒光素、D-熒光素鈉和D-熒光素鉀之間的區(qū)別

主要區(qū)別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高，且溶解速度較快，故在一般的生物學(xué)試驗(yàn)中常用D-熒光素鉀鹽。

5、D-熒光素鉀鹽的保存和運(yùn)輸條件 

保存條件：≤-20°C，避光，保持干燥。（在不打開包裝的條件下，可保存兩年時(shí)間）。

運(yùn)輸條件：高純度的D-熒光素鉀鹽可在短時(shí)間內(nèi)常溫條件下保存，運(yùn)輸條件為常溫。

原裝（沒有打開包裝）熒光素的包裝瓶中充有氬氣，保證其穩(wěn)定性，打開包裝后，請(qǐng)嚴(yán)格按照保存條件保存。

D-熒光素鉀鹽具有易溶于水的特性，其暴露于空氣中，易吸潮。在稱量過程中，請(qǐng)考慮其易吸潮的特性，先進(jìn)行溫度平衡，再快速稱取

1. 注意事項(xiàng)
a) D-熒光素有三種形式，分別為游離態(tài), 鉀鹽、和鈉鹽 ，鈉鹽和鉀鹽形式的 D-熒光素易溶于水性緩沖液 (pH 6.1-6.5)，儲(chǔ)備液可用無ATP的水配制，-20℃避光保存。游離態(tài)須用 DMSO 或者適當(dāng)?shù)膲A中和才能溶解。在較高的 pH 值下，熒光素會(huì)在堿催化下形成脫氫熒光素，并外消旋化為 L-異構(gòu)體。
b) D-熒光素可用于任何現(xiàn)有的報(bào)告分析或 ATP 分析系統(tǒng)。
c) 如果測(cè)試 ATP，請(qǐng)戴上手套并使用不含 ATP 的容器，以盡量減少所有可能的 ATP 污染源。僅使用無菌的無 ATP 水和試劑。使用高壓滅菌水制備所有試劑。
2. 實(shí)驗(yàn)方案
本方案僅提供一個(gè)指導(dǎo)，應(yīng)根據(jù)您的具體需要進(jìn)行修改。
2.1 體外生物發(fā)光圖像分析的示例方案
a) 在 DMSO 中制備熒光素原液。拌勻。立即使用，或一次性分裝，-20℃ 保存，避免反復(fù)凍融，避免光照。
b) 制備0.5-1 mM D-Luciferin工作液，預(yù)熱組織培養(yǎng)基。
c) 從培養(yǎng)的細(xì)胞中吸出培養(yǎng)基。
d) 向細(xì)胞中加入熒光素工作液，并在成像前于 37℃ 孵育細(xì)胞 5-10 分鐘。
2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
由于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)劑量較大，一般為 150 mg/kg，建議選擇鉀鹽或者鈉鹽產(chǎn)品。
2.3 熒光素報(bào)告基因檢測(cè)的示例方案
a) 在 DMSO 中制備熒光素原液。立即使用，或一次性分裝，-20℃ 保存，避免反復(fù)凍融，避免光照。
b) 配制 1 mM D-Luciferin 工作液和 3 mM ATP，1 mM DTT 和 15 mM MgSO4 溶于 25 mM tricine 緩沖液 pH 7.8。
c) 將 5-10 μL 細(xì)胞裂解物移至微孔板中。使用裂解試劑或不含裂解物的緩沖液作為空白。
d) 根據(jù)制造商的說明用熒光素工作溶液灌注發(fā)光計(jì)。
e) 立即注入 200 μL 熒光素工作溶液，積分時(shí)間為 10 秒.

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司