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大鼠血清采用健康大鼠血液為原料，經(jīng)無(wú)菌采集、分離、微孔過濾后而成，性狀為澄清液體，無(wú)噬菌體、超低內(nèi)毒素，無(wú)溶血無(wú)異物無(wú)細(xì)菌真菌支原體霉形體衣原體等，適用于試驗(yàn)室或生化科研相關(guān)試驗(yàn)，滿足不同科研實(shí)驗(yàn)的多種需求。

大鼠血清來(lái)源于非免疫的大鼠宿主，經(jīng)過脂質(zhì)萃取和含NaN3的PBS溶液透析，改善其透明度。推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細(xì)胞涂片上，37℃度孵育10-30分鐘，清除血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過夜。注意：封閉用血清中不能含有目標(biāo)蛋白，且與一抗來(lái)源不同，可用與二抗相同來(lái)源的封閉血清。

 大鼠采血方式：

1、剪尾采血:需血量較少時(shí)常用此法。先將動(dòng)物固定，將鼠尾浸在50℃左右溫水中浸泡幾分鐘或用酒精棉球或二甲苯涂擦鼠尾，使尾部血管充盈，剪去尾尖1～2mm(小鼠)或3～5mm(大鼠)，便血液順血管壁自由流入試管或用血紅蛋白吸管吸取。采血結(jié)束時(shí)，傷口消毒并用棉球壓迫止血。此法每只鼠一般可采血10次以上，小鼠每次可取血0.1mL左右，大鼠可取血0.3～0.5ml。

2、眶后靜脈叢采血:操作者一手固定小鼠或大鼠，拇指和食指盡量將鼠頭部皮膚捏緊，或輕輕壓迫頸部?jī)蓚?cè)，使鼠眼球突出，眶后靜脈叢充血，另一只手持毛細(xì)采血管，以45°從內(nèi)眼角刺入，并向下旋轉(zhuǎn)，感覺刺入靜脈叢后，再向外邊退邊吸，當(dāng)?shù)玫剿�需血量后，放松加于頸部的壓力，并拔出采血器，以防穿刺孔出血。若技術(shù)熟練，此方法在短斯內(nèi)可重復(fù)采血，小鼠一次可采血0.2～0.3ml，大鼠可采血約0.5ml。如只進(jìn)行一次取血，可采用摘眼球法，右手取一眼科彎鑷，在鼠右或左側(cè)眼球根部將眼球摘去，并將鼠倒置；頭向下，抽取血液。

大鼠血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。優(yōu)點(diǎn)：血清中含有許多對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有利的成分，提供豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。缺點(diǎn)：血清的具體成分不明確，不容易控制變量；血清的保存期短，血清中可能含有易變物質(zhì)；血清中可能含有病毒等生物，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成不良影響；使用血清成本較高。

1.提供維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。

2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。

3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。

4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。

5.起酸堿度緩沖液作用。

6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。

應(yīng)用[7][8]

大鼠血清主要用于原代細(xì)胞培養(yǎng)、傳代細(xì)胞培養(yǎng)及病毒疫苗的研制和生產(chǎn)。

在大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)不同培養(yǎng)體系及純化方法的比較研究實(shí)驗(yàn)中比較兩種大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元的培養(yǎng)及純化方法不同組合的優(yōu)劣,探討科學(xué)可靠的神經(jīng)元培養(yǎng)純化方法。

方法:采用DMEM/F12+血清的有血清培養(yǎng)體系和神經(jīng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基(Neurobasal)+B27的無(wú)血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)原代神經(jīng)元。在接種3天后分別采用加入阿糖胞苷和5-氟脫氧尿嘧啶兩種方法進(jìn)行神經(jīng)元的純化。在1天、3天、7天采用形態(tài)學(xué)及7天時(shí)免疫熒光化學(xué)法鑒定神經(jīng)元的純度及生長(zhǎng)狀態(tài)。結(jié)果:1天、3天時(shí),有血清培養(yǎng)體系和無(wú)血清體系中的神經(jīng)元的形態(tài)結(jié)構(gòu)和密度無(wú)明顯差別,在分別加入阿糖胞苷和5-氟脫氧尿嘧啶后,7天時(shí)無(wú)血清體系中加阿糖胞苷組細(xì)胞密度明顯低于其他三組細(xì)胞密度。通過免疫熒光化學(xué)法鑒定可見無(wú)血清體系中的神經(jīng)元純度明顯高于有血清體系。

結(jié)論:有血清體系的神經(jīng)元純度較差,阿糖胞苷和5-氟脫氧尿嘧啶不能顯著抑制膠質(zhì)細(xì)胞等雜細(xì)胞的生長(zhǎng)。無(wú)血清培養(yǎng)體系加阿糖胞苷的神經(jīng)元細(xì)胞受損較多,無(wú)血清培養(yǎng)體系加5-氟脫氧尿嘧啶純化培養(yǎng)的大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元,純度較高,細(xì)胞數(shù)量合適,是體外研究神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)理論的良好模型。

參考文獻(xiàn)

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[3]Insulin Receptor-Protein Kinase C-Sig-naling Mediates Inhibition of Hypoxia-In-duced Necrosis of Cortical Neurons.Hamabe W,Fujita R,and Ueda Hetal.Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics.2005

[4]Influence of ser-um-free mediumon the expression of glutamate transporters and the sus-ceptibility to glutamate toxicity in cultured cortical neurons.Velasco I,Velasco-Velazquez MA,Salazar P,et al.Journal of Neuroscience Research.2003

[5]Are-liable method for culture of dissociated mouse cerebellar cells enriched for Purkinje neurons.Tabata T,Sawada S,Araki Ket al.Journal of Neuroscience Methods.2000

[6]Modulation of Microtubule Dynamic Instability in vivo by Brain Microtubule Associated Proteins.Dhamodharan,R.,Wadsworth,P.Journal of Cell Science.1995

[7]Roles of collagenases and other proteolytic enzymes in the dispersal of animal tissues.Kono T.Biochimica et Biophysica Acta.1969

[8]張瑋,唐卉凌,王筠,李衛(wèi)紅,侯金才,曹進(jìn),李澎濤.大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元原代培養(yǎng)不同培養(yǎng)體系及純化方法的比較研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2010,10(06):1043-1046.