小鼠表皮成纖維細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構，由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

分離的小鼠表皮成纖維細胞采用先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質量檢測：

分離的小鼠表皮成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

細胞培養(yǎng)狀態(tài) 發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

使用方法： 小鼠表皮成纖維細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)程成纖維細胞樣，在我們標準操作流程下，細胞可傳3-5代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。 客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度 的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

貼壁細胞傳代

吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng) 瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變 圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；

用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基。

細胞實驗 因原代細胞貼壁特殊性，原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿 (如玻璃爬片、培養(yǎng) 板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒 貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2 )，多聚懶氨酸PLL(0.1mg/ml)， 明膠(0.1%)， 依據(jù)細胞種類而定 。 四、注意事項

培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。

在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我們溝通；由于運輸?shù)脑�因，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡 告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

該細胞只可用于科研。 備注：由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司