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當前位置：首頁 - 產(chǎn)品中心 - 感受態(tài) - 發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài) -K599感受態(tài)（電轉）

產(chǎn)品分類：

Nexell細胞系/株 Nexell原代細胞 Nexell細胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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相關產(chǎn)品

K599感受態(tài)（電轉）

產(chǎn)品貨號：EC96315

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul

產(chǎn)品價格： ￥電議

點擊次數(shù)：1051

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標簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡介

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌，它能夠

感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。K599 發(fā)根農(nóng)桿菌（NCPPB2659）含

有 pRi2659 農(nóng)桿堿型 Ri 質粒，具有廣泛的宿主范圍（葫蘆科，豆科，茄科等），同時具有鏈霉素

抗性。本公司生產(chǎn)的 K599 化學轉化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301

質粒（卡那霉素

抗性）檢測，轉化效率>105 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

K599

電轉感受態(tài)細胞

10 ×50 μL

100 ×50μL

定制

基因型：Agrobacterium rhizogenes (StrR ) pRi2659 (agropine type)

存儲條件

-80 ℃保存; 請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質量控制

除農(nóng)桿堿型 Ri 質粒 pRi2659 外，無外源質粒 DNA 殘留

電轉法轉化效率≥105 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷；或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工

作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預冷；

2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質粒 DNA（體積不大于 5μl），用

200μl 槍頭將感受態(tài)-質粒混合物快速轉移到預冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；

3. 開啟電轉儀，設置參數(shù)（2500V ，200Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成后快速插

入冰中，加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細胞轉移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。

（注：此電轉化參數(shù)為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作）

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應抗生素的 YEB 平

板上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天。

注意事項

1. 加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的 1/10；

2. 電轉感受態(tài)細胞中不可混入氣泡，轉化高濃度的質�？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量；

3. 平板上陽性克隆密度不宜過大，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量或最終用于涂板的菌量；

4. K599 具有鏈霉素抗性，不可用于具有鏈霉素抗性質粒的轉化

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司

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