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產品分類：

Nexell細胞系/株 Nexell原代細胞 Nexell細胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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GV3101（pJlC SA-rep）（電轉）

產品貨號：EC96308

產品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul

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標簽：感受態(tài)

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產品簡介

GV3101(pJIC SA_Rep)菌株為 C58 型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因 Rif，為了便于轉

化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型 Ti 質粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質粒含有 vir 基

因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質粒自身的 T-DNA 轉移功

能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體 T-DNA 順利轉移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 質粒含有篩選

標簽：Gent，賦予 GV3101 菌株慶大霉素抗性；在 GV3101 菌株中轉入 help 質粒：pJIC SA_Rep 即為

GV3101(pJIC SA_Rep)菌株，可幫助 pgR106，pgR107，pGreen，pGs2 系列質粒在農桿菌中復制，同時

賦予該菌株四環(huán)素（Tet）抗性。適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。本公司生產

的 GV3101(pJIC SA_Rep)化學轉化感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pGs2(卡那霉素抗性)質粒檢測轉化效

率>105 cfu/μg DNA。

產品組成

組分

GV3101(pJIC SA_Rep)

電轉感受態(tài)細胞

10 ×50 μL

100 ×50μL

定制

基因型：C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline(pJIC SA_Rep -TetR)

存儲條件

-80 ℃保存; 請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質量控制

除胭脂堿型 Ti 質粒 pMP90 和 pJIC SA_Rep 質粒外，無外源質粒 DNA 殘留；

電轉法轉化效率≥105 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預冷；或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工

作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預冷；

2. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質粒 DNA（體積不大于 5μl），用

200μl 槍頭將感受態(tài)-質�；旌衔锟焖俎D移到預冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；

3. 開啟電轉儀，設置參數（2500 V ，200 Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成后快速插

入冰中，加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細胞轉移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。

（注：此電轉化參數為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉儀所推薦的 Protocol 進行操作）

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應抗生素的 YEB 平板

上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天（當平板只含有 50μg/ml Kan 時，28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同

時加入 50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 時，需 28 ℃培養(yǎng) 60h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時，則需要

28 ℃培養(yǎng) 72~90 h）。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞解凍后應立即使用；

2. 加入的待轉化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10；

3. 利福平濃度不應高于 25μg/μl，過高的利福平濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率；

4. 由于 Ti 質粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關抗性基因可以不用添加。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司

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