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產(chǎn)品分類：

Nexell細(xì)胞系/株 Nexell原代細(xì)胞 Nexell細(xì)胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細(xì)胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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GV3101（pSoup-19）（電轉(zhuǎn)）

產(chǎn)品貨號：EC96303

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×50ul/100×50ul

產(chǎn)品價格： ￥電議

點擊次數(shù)：1353

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標(biāo)簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡介

P19 蛋白來源于番茄叢矮病毒，可抑制宿主對外源基因的 RNA 沉默效應(yīng)，提高異源基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性，

進(jìn)而促進(jìn)異源蛋白的表達(dá)，廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物及煙草葉片，擬南芥葉片，番茄葉片或原生質(zhì)體的瞬時

表達(dá)系統(tǒng)中。GV3101 菌株為 C58 型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因 Rif，為了便于轉(zhuǎn)

化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir 基因

且可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA 順利轉(zhuǎn)移。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽： Gent ，

賦予 GV3101 菌株慶大霉素抗性；在 GV3101 菌株中轉(zhuǎn)入 help 質(zhì)粒： pSoup-p19 即為 GV3101(pSoup-p19)

菌株，可幫助 pGreen，62SK，pGs2 等質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制，同時賦予該菌株四環(huán)素（Tet）抗性。適用

于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司開發(fā)的 GV3101 (pSoup-p19)電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適

用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng)

pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

GV3101（pSoup-p19）

10 ×50μL

100 ×50μL

定制

電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

基因型：

C58 (RifR ) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline(pSoup-p19-TetR)

存儲條件

-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90 和 pSoup-p19 質(zhì)粒外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率

≥105 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預(yù)冷；或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出，在超凈工

作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上，使乙醇充分揮發(fā)，然后插入冰中預(yù)冷；

取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 質(zhì)粒 DNA（體積不大于 5μl），用

200μl

槍頭將感受態(tài)-質(zhì)�；旌衔锟焖俎D(zhuǎn)移到預(yù)冷的電擊杯中，蓋上杯蓋；

3. 開啟電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)（2500 V ，200 Ω，25μF），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成后快速插

入冰中，加入

900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到無菌空管中，28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。

（

注：此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦，使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進(jìn)行操作）

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻，并涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板上，

倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天（當(dāng)平板只含有 50μg/ml Kan 時，28℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同時加入

50μg/ml Kan，20μg/ml Rif 時，需 28 ℃培養(yǎng) 60h；如果使用的平板含有 50μg/ml Rif 時，則需要 28 ℃

培養(yǎng)

72~90 h）。

注意事項

感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用；

加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；

利福平濃度不應(yīng)高于 25μg/μl，利福平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率；

由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添加。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司

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