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人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞 iehESCs

產(chǎn)品貨號(hào):BH3482

產(chǎn)品規(guī)格:1×10^6

產(chǎn)品價(jià)格: ¥ 電議

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標(biāo)簽:細(xì)胞系 
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產(chǎn)品基本信息
細(xì)胞名稱:iehESCs,子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞
種屬來源:人
組織來源:子宮
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)
培養(yǎng)基::D/F12+10%FBS+PS
生長(zhǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代方法:1:2 至 1:3,每周 3 次
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲(chǔ)存
支原體檢測(cè):無
細(xì)胞培養(yǎng)操作
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1 mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 4 mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min,棄去上清液,加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm 皿中,加入約4 mL
培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 min(視細(xì)胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 2-3ml 完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm 離心 5 min,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2 mL 培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8 mL 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm 條件下離心 4 min,棄去上清液,用PBS 清洗一遍,棄盡 PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度 5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存 1mL 細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正,F(xiàn)象。.觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1:2 傳代 。
9. 注意: 1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。
 

原創(chuàng)作者:上海語純生物科技有限公司

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