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產(chǎn)品分類(lèi)：

Nexell細(xì)胞系/株 Nexell原代細(xì)胞 Nexell細(xì)胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細(xì)胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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PRODUCT SHOW

相關(guān)產(chǎn)品

LBA4404感受態(tài)

產(chǎn)品貨號(hào)：CC96302

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul

產(chǎn)品價(jià)格： ￥電議

點(diǎn)擊次數(shù)：1351

在線詢價(jià)

標(biāo)簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

LBA4404菌株為 Ach5型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因 Rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此

菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的章魚(yú)堿型 Ti 質(zhì)粒 pAL4404，此質(zhì)粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入

植物基因組必需的元件，pAL4404 質(zhì)粒自身的 T-DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T

DNA 順利轉(zhuǎn)移)。 pAL4404 型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：Strep，賦予 LBA4404 菌株鏈霉素抗性，適用于菸

草、番茄、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的 LBA4404 化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，

pCAMBIA2301 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

LBA4404

化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：Ach5 (RifR) Ti pAL4404 (StrepR) Octopine

存儲(chǔ)條件

-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

除章魚(yú)堿型 Ti 質(zhì)粒 pAL4404 外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥104 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分

鐘（或干冰乙醇浴和-80℃冰凍）、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘；

3.加入 900 μl 無(wú)抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基，于 28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)；

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板

上，倒置放于 28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天當(dāng)平板只含有 50 μg /ml Kan 時(shí)，28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同時(shí)

加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 時(shí)，需 28℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要 28 ℃

培養(yǎng) 72-90 h）。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；

3. 利福平濃度不應(yīng)高于 25 μg/μl，利福平濃度過(guò)高不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。

4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添加。

原創(chuàng)作者：上海語(yǔ)純生物科技有限公司

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