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產(chǎn)品分類：

Nexell細(xì)胞系/株 Nexell原代細(xì)胞 Nexell細(xì)胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細(xì)胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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EHA105（pSoup）感受態(tài)

產(chǎn)品貨號(hào)：CC96314

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul

產(chǎn)品價(jià)格： ￥500

點(diǎn)擊次數(shù)：1336

在線詢價(jià)

標(biāo)簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

EHA105 菌株由 EHA101 菌株改造而來，為 C58 型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基

因 Rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA105

(pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，

pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的 T-DNA 轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T

DNA 順利轉(zhuǎn)移)。在 EHA105 菌株中轉(zhuǎn)入 help 質(zhì)粒：pSoup 即為 EHA105 (pSoup)菌株，可幫助

pGreen，62SK，pGs2 系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制，同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素（Tet）抗性，適用于水稻、

煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的 EHA105(pSoup)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，

pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

EHA105(pSoup)

化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10 ×100 μL

100 ×100 μL

定制

基因型：C58 (RifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine (pSoup-TetR)

存儲(chǔ)條件

-80 ℃保存; 請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

除琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒 pEHA105 和 pSoup 質(zhì)粒外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥104 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分

鐘（或干冰乙醇浴和-80℃冰凍）、37 ℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘；

3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基，于 28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)；

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板

上，倒置放于 28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天（當(dāng)平板只含有 50 μg/ml Kan 時(shí)，28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同

時(shí)加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 時(shí)，需 28 ℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要 28℃

培養(yǎng) 72-90 h）。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；

3. 利福平濃度不應(yīng)高于 25 μg/μl，過高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率；

4.因?yàn)?Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮添加相應(yīng)抗生素。

原創(chuàng)作者：上海語(yǔ)純生物科技有限公司

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