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產(chǎn)品分類：

Nexell細(xì)胞系/株 Nexell原代細(xì)胞 Nexell細(xì)胞培養(yǎng)液感受態(tài) 定制培養(yǎng)基微生物智能冷鏈箱血液制品細(xì)胞培養(yǎng)耗材 Nexell輔助試劑

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GV3101（pSoup-19）感受態(tài)

產(chǎn)品貨號：CC96303

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul

產(chǎn)品價格： ￥電議

點擊次數(shù)：1385

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標(biāo)簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡介

p19 蛋白來源于番茄叢矮病毒，可抑制宿主對外源基因的 RNA 沉默效應(yīng)，提高異源基因轉(zhuǎn)錄本的

穩(wěn)定性，進而促進異源蛋白的表達(dá)，廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物及煙草葉片，擬南芥葉片，番茄葉片

或原生質(zhì)體的瞬時表達(dá)系統(tǒng)中。GV3101 菌株為 C58 型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗

性基因 Rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90

(pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有 vir基因，pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：Gent，

賦予 GV3101菌株慶大霉素抗性；在 GV3101菌株中轉(zhuǎn)入 help質(zhì)粒：pSoup-p19即為 GV3101(pSoup

p19)菌株，可幫助 pGreen，62SK，pGs2 等質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制，同時賦予該菌株四環(huán)素（Tet）抗

性。適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。本公司生產(chǎn)的 GV3101(pSoup-p19)化

學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率≥ 103 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

GV3101（pSoup-p19）

化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline(pSoup-p19-TetR)

存儲條件

-80 ℃保存；請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

除胭脂堿型 Ti 質(zhì)粒 pMP90 和 pSoup-p19 質(zhì)粒外，無外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥103 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μl 感受態(tài)細(xì)胞中，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分

鐘（或干冰乙醇浴和-80℃冰凍）、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘；

3.加入 900 μl 無抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基，于 28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時；

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板

上，倒置放于 28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天（當(dāng)平板只含有 50 μg/ml Kan 時，28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同

時加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 時，需 28 ℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要

28 ℃培養(yǎng) 72-90 h）。

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰浴中解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；

3. 利福平濃度不應(yīng)高于 25 μg/μl，利福平濃度過高不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。

4. 由于 Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以相關(guān)抗性基因可以不用添加。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司

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