細(xì)胞介紹

種屬:成年雌性負(fù)鼠
細(xì)胞來源：國家資源庫

細(xì)胞形態(tài): 上皮樣,貼壁生長。

含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

 用途：僅供科研使用。
細(xì)胞背景：OK 是從成年雌性負(fù)鼠的近端小管中分離出來的上皮細(xì)胞系。此細(xì)胞株最初是為研究 X 染色體失活時(shí)提供 X 染色體，隨后發(fā)現(xiàn)它是極好的腎近曲小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)模型。此細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)表達(dá)多種受體，α 2 腎上腺素能表達(dá);心房利鈉肽(ANP)表達(dá);5 -羥色胺,表達(dá);甲狀旁腺激素(PTH)表達(dá);α 2 腎上腺素能;5 -羥色胺;甲狀旁腺激素;心鈉肽(ANP)。并被廣泛地用作研究這些受體的模型。
培養(yǎng)條件:
1）準(zhǔn)備 DMEM + FBS 10% +P/S 1%

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。
貼壁細(xì)胞參考：

一. 收貨后消毒靜置待細(xì)胞全部穩(wěn)定后拍照。棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

二. T25 瓶加入 0.25％EDTA 胰蛋白酶 1-2ml 于培養(yǎng)瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細(xì)胞很容易脫落的就培養(yǎng)箱外面消化震蕩等脫落 90%以上終止消化，一般小于 1分鐘以內(nèi)，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細(xì) 胞也會(huì)自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細(xì)胞則置于 37℃培養(yǎng)箱中消化提高效率，每 40-50 秒拿出培養(yǎng)箱震蕩

注意事項(xiàng)：
幫助細(xì)胞脫落，如果脫落 90%以上則對(duì)應(yīng) 3-6ml 含有 10%血清的完全培養(yǎng)基終止徹底，以防胰酶殘留。如果貼壁 非常牢固的細(xì)胞，脫落的比例比較低，也不超過2分鐘后終止消化徹底，再加入 1ml 完全培養(yǎng)基讓細(xì)胞緩沖后再過2分鐘進(jìn)行二次消化，反復(fù)分步消化以降低單次消化時(shí)長，減少刺激，保護(hù)細(xì)胞膜�；虿捎霉萎a(chǎn)刮細(xì)胞的方式處理也可以�？倸w原則是達(dá)到消化目的的同時(shí)減少細(xì)胞膜受到的損傷越小越好。

三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2~1:5 的比例進(jìn)行。期間多的細(xì)胞一定保存多份細(xì)胞凍存管備種。
運(yùn)輸形式：
常溫發(fā)貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置 2-6 小時(shí)后觀察密度和狀態(tài)并拍照 2-3 張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例 1:2，等再次長滿后傳代時(shí)建議凍存其中一整瓶成 1 個(gè) 1ml 凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存足量種子后才擴(kuò)增做實(shí)驗(yàn)，以防突發(fā)情況引起斷種。

干冰發(fā)貨：常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管 2 只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，第一個(gè)復(fù)蘇不成功時(shí)嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個(gè)，均沒有復(fù)蘇成功的情況及時(shí)留存復(fù)蘇照片通知銷售處理售后問題。
生物安全：
1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司