支原體高效清除劑(2000X)

產(chǎn)品描述

支原體污染是細胞培養(yǎng)領域的世界性問題，世界各國的細胞支原體污染平均比例為30~60%。支原體直徑約為 0.1~0.3μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22~0.45μm），因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。支原體可通過細胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染、血清等添加物而帶入污染。由于支原體無法通過常規(guī)的光學顯微鏡觀察到，不會引起培養(yǎng)基混濁，因此細胞被支原體污染一般難以察覺。支原體會消耗必須氨基酸，影響細胞生長速率，造成代謝物累積，改變細胞形態(tài)，影響DNA、RNA、蛋白質的合成，抑制細胞因子表達，改變被污染細胞的基因表達譜，誘導染色體畸變。Anweisci支原體高效清除劑經(jīng)過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，能以較低的濃度殺滅支原體，不僅可用于細胞株/系，還可應用于敏感和較脆弱的細胞，如干細胞和原代細胞。本產(chǎn)品僅12小時就可以顯著抑制支原體生長，1~2周左右即可清除支原體污染，且不影響細胞本身的代謝，完美兼具特異性和高效清除支原體的特點，且對細胞溫和無損傷，最大程度上挽救您的珍貴細胞。

產(chǎn)品優(yōu)勢

ê高效性，12h即可有效抑制支原體的增殖；

ê高特異性，特異性清除支原體；

ê無耐藥性，活性成分為多肽類，不會產(chǎn)生耐藥性；

ê高利用率，未被利用的成分可降解為氨基酸被細胞利用；

ê高安全性，對細胞幾乎無毒性，已在上百種細胞上驗證。

質量控制

R R 通過支原體、真菌、支原體、內毒素檢測。

R R 通過滲透壓、pH 檢測。
R    通過產(chǎn)品性能檢測。

運輸與保存方法

冰袋運輸；

-20℃避光保存，保質期2年；

使用方法

從-20℃冰箱內取出支原體高效清除劑，將試劑管瞬時離心（3000rpm，3~5s）后放置于EP管架上，

用75%的酒精噴灑試劑管的表面，在生物安全柜中進行無菌操作；

以T25細胞培養(yǎng)瓶為例

清除支原體污染操作規(guī)程

對于已檢測或懷疑有支原體污染的細胞，在細胞培養(yǎng)基中加入適量支原體高效清除劑，通常推薦使用的稀釋倍數(shù)為2000×，如：6 mL的細胞培養(yǎng)基加入3 μL的支原體高效清除劑混勻。連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周即可有效清除支原體污染。若支原體污染較嚴重，可酌情增加藥物濃度以提高清除支原體的效率，推薦嘗試最小稀釋倍數(shù)、中間稀釋倍數(shù)、最大稀釋倍數(shù)三個濃度進行測試。以細胞系（成纖維樣）為例，建議將細胞分為三份，分別采用500×、1000×、2000×三個濃度進行支原體清除。若500×對細胞生長無明顯影響，可采用500×濃度快速清除支原體，若500×對細胞生長有明顯影響，則采用1000×濃度清除支原體，連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周（或傳代3次）后，檢測是否還存在支原體污染。如果還存在支原體污染，可繼續(xù)培養(yǎng)1周。

注意：可參考下表選擇稀釋倍數(shù)，達到最佳清除效果。


預防支原體污染操作規(guī)程

若細胞需長時間培養(yǎng)，建議每2~3周進行定期預防。在細胞培養(yǎng)基中加入適量支原體高效清除劑，通常推薦使用的稀釋倍數(shù)為3000×，如：6mL的細胞培養(yǎng)基加入2μL的支原體高效清除劑混勻。連續(xù)加藥培養(yǎng)1~2周，即可有效防止支原體污染或抑制支原體增殖。
注意：可參考下表選擇稀釋倍數(shù)，有效預防支原體污染。


實驗流程圖

特別提醒

①使用本試劑前請仔細閱讀說明書；

②本產(chǎn)品經(jīng)0.1 μm 過濾除菌，使用本產(chǎn)品時無需過濾，可直接加入培養(yǎng)基使用；

③本試劑具有專利技術，-20℃保存時不凍結，使用時無需解凍，從-20℃取出即可使用；

④為了發(fā)揮最好的藥效，含藥培養(yǎng)基建議現(xiàn)配現(xiàn)用，如果加藥培養(yǎng)基未用完，于4℃冰箱中避光保存，2周內用完，使用培養(yǎng)基前需預熱至37℃；

⑤貼壁細胞換液或傳代前，棄去舊的培養(yǎng)基，用含1000×支原體高效清除劑的PBS輕輕沖洗細胞表面2次。懸浮細胞、貼壁不牢的細胞、半貼半懸細胞換液或傳代前，可利用支原體直徑遠小于細胞直徑的特點，采用150 g（或900 rpm）低速離心5mins，棄去舊的培養(yǎng)基，再用含1000×支原體高效清除劑的PBS輕輕沖洗細胞2次；

⑥用含藥PBS清洗細胞后，加入含有支原體高效清除試劑的新鮮完全培養(yǎng)基（傳代后鋪細胞需更換為新的瓶/板），1天換液1次， 連續(xù)加藥4~7天，或者2天換液1次，連續(xù)加藥7~14天，若細胞污染非常嚴重時，需增加換液頻率和延長處理時間；

⑦若細胞污染嚴重，且需要快速清除支原體時，即可采用高濃度藥物（500×~1000×）進行清除，傳代后，為了防止藥物影響細胞貼壁，建議待大部分細胞貼壁后再加入藥物，即先用完全培養(yǎng)基重懸細胞，鋪瓶，0.5~2h后在培養(yǎng)基中加入對應稀釋倍數(shù)的支原體高效清除劑，輕輕混勻，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；

⑧在添加了本試劑的細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)1~2周后，推薦使用支原體PCR檢測試劑盒（貨號: MD01-001）判斷是否還存在支原體污染。

⑨本試劑可以有效抑制或去除多種支原體，但并不能確�？梢匀コ龑嶋H實驗操作過程中遇到的任何類型的支原體。由于細胞可能會污染多種支原體，如遇污染極其特殊的支原體類型，可先用支原體高效清除劑處理1~2周后，使用支原體清除試劑Plus進行后續(xù)1~2周的支原體清除處理，2~3周后即可清除全部支原體。

⑩如遇個別細胞對本試劑敏感，細胞生長速度明顯受影響時，建議減量使用或進行稀釋度測試；

⑪支原體高效清除劑處理后，會有很好的預防和清除效果，但是如果環(huán)境或使用試劑中仍有污染源存在，細胞可能會再次污染，因此需做好適當?shù)念A防措施
⑫加入本產(chǎn)品進行支原體預防和清除時，無需添加雙抗（青霉素-鏈霉素）；

⑬為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；

⑭本產(chǎn)品僅供研究或進一步生產(chǎn)使用，不得用于診斷或治療。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司