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D=4418

細胞特性：形態(tài)：淋巴母多角形細胞樣,貼壁+懸浮生長。用途：僅供科研使用

培養(yǎng)條件 ：
1）500ML 完全培養(yǎng)基：IMDM:F10/F12=2:1（313ml:157ml）培養(yǎng)基+FBS 10%（50ml）+2.5mg/500ml 胰島素+20ug/500ml 氫化可的松+2.5ug/500ml EGF+ P/S 1% 雙抗1%

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%
注意事項：MOC1 細胞活性特別高，增值速度非�？�，不建議傳代密度太大，而選擇稀一點重鋪，等長滿 80%左右傳代的時候，很難消化下來，建議加入 0.25%EDTA 的胰酶進去后充分混勻所有細胞都接觸到胰酶，放置到培養(yǎng)箱進行消化，時長大約是 3-4 分鐘左右后拿出來，在培養(yǎng)器皿的側邊進行拍打幫助細胞脫落，拍打過程大約持續(xù) 2 分鐘左右才會脫大部分細胞，如果脫落比例還不是很多，也可以重新放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化 1-2 分鐘后再次拿出來進行拍打脫落，等 80-90%細胞都脫落后再終止消化，離心重懸再重新鋪瓶，分散均勻。

MOC2 細胞貼壁性和常規(guī)細胞類似沒有特別牢固。倍增周期也沒有 MOC1 快。采用常規(guī)消化方法處理。

貼壁細胞參考：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置 于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察 細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3-4ml 含10%FBS 的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:5 的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。
懸浮細胞參考：

懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在 1×105~1×106 個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中 1000rpm，離心 5min，棄去上清，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:4 的比例進行

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司