【儲(chǔ)存條件】

長(zhǎng)期保存，請(qǐng)置于4˚C (切勿結(jié)冰凍住)。

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

Nexell Lipo2000 Transfection Reagent is a proprietary formulation for transfecting nucleic acids into a wide range of eukaryotic

cells.  DNA-Lipo 2000 complexes must be made in serum-free medium such as Opti-MEM® Reduced Serum Medium and can be added directly to cells in culture medium, in the presence or absence of serum/antibiotic. It is not necessary to remove complexes or change/add medium after transfection. The amount of Lipo 2000 Reagent required for successful transfection varies depending on the cell type and passage number. Start any new transfection by testing the recommended four concentrations of Lipo2000 Reagent to determine an optimum amount.

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

1. Plate cells so they will be 70–90% confluent at the time of transfection.

2. Prepare plasmid DNA-lipid complexes.

3. Add DNA-lipid complexes to cells.

【操作步驟】

A、Lipo2000 DNA Transfection Reagent Protocol（具體方法見(jiàn)后面）

Component                         96-well          24-well             6-well

Final DNA per well                   100 ng          500 ng             2500 ng

Final Lipo2000 Reagent per well      0.2–0.5 μL       1.0–2.5 μL         5.0–12.5 μL

B、Co-Transfection of Plasmid DNA and siRNA

Transfect plasmid DNA and siRNA at the same time using Lipo2000 Reagent by adding 30 pmol (~0.6 μg) of siRNA per 1 μg of DNA.

C、mRNA Transfection

mRNA can be transfected in a 24-well plate using Lipo2000 Reagent by adding 0.5–1 μg of mRNA per well.

D、Lipo 2000 DNA Transfection Reagent Protocol（具體方法）

Transfect cells according to the following chart. Volumes are given on a per-well basis. Each reaction mix is sufficient for triplicate (96-well), duplicate (24-well), and single well (6-well) transfections, and accounts for pipetting variations. Adjust the amounts of components according to your tissue culture format. For additional information on scaling your transfection reaction, see page 1.

【舉例：質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染】

對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，DNA(µg)與Lipo2000 (µl)的比例為1:2~1:3。轉(zhuǎn)染時(shí)高的細(xì)胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)水平，并能減少細(xì)胞毒性。

以24孔板為例

貼壁細(xì)胞： 轉(zhuǎn)染前一天，用500 µl不含抗生素的培養(yǎng)基接種0.5～2×105細(xì)胞，使之第二天能達(dá)到70-90%匯合。

懸浮細(xì)胞：在準(zhǔn)備DNA-Lipo2000復(fù)合物之前，用500 µl不含抗生素的培養(yǎng)基接種4～8×105細(xì)胞即可。

2. 對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品，進(jìn)行以下操作

a. 在eppendorf管里分別加入50 µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA輕柔混勻，制成DNA稀釋液。

b. 在另一個(gè)eppendorf管里分別加入50µl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 µl Lipo2000 (注意用前先混勻)，輕柔混勻，制成Lipo2000 稀釋液，室溫靜置5分鐘。

c. 將DNA稀釋液和Lipo2000稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置20分鐘， 形成DNA-Lipo2000復(fù)合物。DNA-Lipo2000復(fù)合物在室溫下可穩(wěn)定存在6小時(shí)。

3. 將DNA-Lipo2000復(fù)合物加入到接種好的細(xì)胞中，將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動(dòng)，使復(fù)合物分散均勻。

4. 在37℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6小時(shí)后更換培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)18～48小時(shí)。

5. 如要篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后將細(xì)胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中，第二天加入選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化 為達(dá)到最高的轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì)胞毒性的影響，可以對(duì)DNA和Lipo2000的比例以及細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化，一般在1:0.5~1:5的范圍內(nèi)優(yōu)化DNA (µg)和Lipo2000 (µl) 的比例。

不同細(xì)胞培養(yǎng)板中轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)基、核酸及Lipo2000用量

Lip2000轉(zhuǎn)染試劑用于不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)用量參考（以96孔板為例）

常見(jiàn)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率（僅供參考，實(shí)驗(yàn)條件不同轉(zhuǎn)染效率會(huì)有差別）：

【備注】

本產(chǎn)品僅供科研使用。在確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)，本公司承諾為客戶免費(fèi)更換等量的質(zhì)量合格產(chǎn)品。

原創(chuàng)作者：上海語(yǔ)純生物科技有限公司

• 語(yǔ)純生物（Nexell）內(nèi)皮專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞效果顯著 2024/6/29