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Rosetta-gami B 感受態(tài)

產(chǎn)品貨號(hào)：CC96146

產(chǎn)品規(guī)格：10 ×100ul/100×100ul

產(chǎn)品價(jià)格： ￥電議

點(diǎn)擊次數(shù)：1340

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標(biāo)簽：感受態(tài)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Rosetta-gami B 系列菌株來(lái)源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列，Rosetta 系列菌株和

Origami 系列菌株的優(yōu)點(diǎn)，極大的增強(qiáng)了細(xì)胞內(nèi)二硫鍵的形成和含有在大腸桿菌中稀有密碼子的真

核細(xì)胞蛋白的表達(dá)能力。Rosetta-gami B系列菌株是來(lái)源于 Origami B系列菌株，攜帶有TrxB和Gor

基因突變，提高含二硫鍵正確折疊蛋白的高效表達(dá)。本菌株含有 pRARE 質(zhì)粒，能夠提供原

Rosetta(DE3)宿主菌含有的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六個(gè)稀有密碼子的 tRNA 外，增

加了真核細(xì)胞的在大腸桿菌中的蛋白表達(dá)水平。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase

(gor)基因上同時(shí)含有突變，這使得該菌株能夠更加高效的在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)生成二硫鍵，有助于含二硫

鍵蛋白的活性蛋白形成。TrxB 和 Gor 基因突變使得質(zhì)粒能夠分別具有卡那和四環(huán)素抗性，所以本

菌株無(wú)法用于卡那和四環(huán)素抗性質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。Rosetta-gami B感受態(tài)細(xì)胞來(lái)源于含有 BL21系列

菌株中的 lacZY 基因突變，能夠通過(guò) IPTG 高效控制目的基因的表達(dá)。Rosetta-gami B 感受態(tài)細(xì)胞能

夠用于氨芐抗性和壯觀霉素抗性質(zhì)粒的原核表達(dá)。Rosetta-gami B 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，

pUC18 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品組成

組分

Rosetta-gami B

感受態(tài)細(xì)胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR , KanR , TetR)

存儲(chǔ)條件

-80 ℃保存；請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

質(zhì)量控制

無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；

化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，輕輕彈勻，冰上孵育 30 min；

3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中，不要晃動(dòng)，熱激 90s 后，立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min；

4. 向離心管中加入 900μL LB 或 SOC 培養(yǎng)基（室溫或 37 ℃預(yù)熱），然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min；

5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上，于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用；

2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；

3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞，僅用手指輕彈即可；

4. 為確保最高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫，并且要盡量輕柔。

原創(chuàng)作者：上海語(yǔ)純生物科技有限公司

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