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Rosetta 2 (DE3)pLacl 感受態(tài)

產(chǎn)品貨號:CC96113

產(chǎn)品規(guī)格:10 ×100ul/100×100ul

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標簽:感受態(tài) 
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產(chǎn)品簡介
Rosetta2(DE3) LacI 來源于 Rosetta(DE3),本菌株含有 pLacIRARE2 質(zhì)粒,除了能夠提供原
Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 六個稀有密碼子的 tRNA 外,還
提供了第七個稀有密碼子 CGG tRNA,因此該宿主菌相對于其他大腸桿菌,能夠提供更加通用
的蛋白質(zhì)表達能力。該菌株可表達 T7 RNA 聚合酶,故而適用于 pET 系列載體及其他 T7 啟動子系
列載體。該菌株含有 pLacIRARE2 質(zhì)粒,具有氯霉素抗性,能夠額外表達 lac 轉(zhuǎn)錄抑制蛋白,可抑
制目的蛋白的本底表達水平。此外,pLacIRARE2 質(zhì)粒的起始復制位點是 p15 Origin, 這使得該質(zhì)粒
能夠和 pUC-pBR322-衍生的質(zhì);ハ喙泊妗=(jīng) pUC18 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化檢測, Rosetta 2 (DE3)pLacI 感受
態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率可達 107 cfu/μg DNA 以上。
產(chǎn)品組成
組分 
Rosetta2(DE3) pLacI
感受態(tài)細胞
10 × 100μL
100 × 100μL
定制
基因型:F- ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3) pLacIRARE2 (CamR)
存儲條件
-80 ℃保存,請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
化學法轉(zhuǎn)化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min;
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動,熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min
4. 向離心管中加入 900 μL LB SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37℃預熱),后置于 37 ℃搖床復壯 45 min
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞冰水浴中解凍后應立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應超過感受態(tài)細胞體積的 1/10;
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保最高轉(zhuǎn)化效率,整個操作過程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

原創(chuàng)作者:上海語純生物科技有限公司

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