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M15(pREP4)感受態(tài)

產(chǎn)品貨號(hào):CC96190

產(chǎn)品規(guī)格:10 ×100ul/100×100ul

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M15(pREP4)蛋白表達(dá)菌株含有 pREP4 質(zhì)粒,該質(zhì)粒通過(guò) p15A 復(fù)制子啟動(dòng)復(fù)制,可以與許多原核
表達(dá)質(zhì)粒共存于同一大腸桿菌細(xì)胞中;同時(shí)該質(zhì)粒攜帶 lacI 基因,可高效表達(dá) LacI 抑制蛋白,在
IPTG誘導(dǎo)前可抑制目標(biāo)蛋白的本底表達(dá),特別適合毒性基因的表達(dá)。M15(pREP4)菌株是 PQE系列
質(zhì)粒的配套菌株,特別適合 PQE 系列質(zhì)粒或由 E. coli T5 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)蛋白表達(dá)的質(zhì)粒。pREP4 質(zhì)粒
賦予該菌株卡那霉素抗性。吐露港生產(chǎn)的 M15(pREP4)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC18 質(zhì)粒檢
測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá) 108 cfu/μg DNA
產(chǎn)品組成
組分
M15(pREP4)
感受態(tài)細(xì)胞
10 × 100 μL
100 × 100 μL
定制
基因型:F- φ80 lacZΔM15 thi lac- mtlrecA+ KanR
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存;請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留;
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕彈勻,冰上孵育 30 min
3. 將離心管置于 42 ℃水浴鍋中,不要晃動(dòng),熱激 90s 后,立刻置于冰水浴中靜置 2-3 min;
4. 向離心管中加入 900μL LB SOC 培養(yǎng)基(室溫或 37 ℃預(yù)熱),然后置于 37 ℃搖床復(fù)壯 45 min;
5. 取不同體積的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,用無(wú)菌涂布棒均勻涂布于正確抗性的平板上,于 37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞冰水浴中解凍后應(yīng)立即使用;
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10;
3. 加入待轉(zhuǎn)化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受態(tài)細(xì)胞,僅用手指輕彈即可;
4. 為確保最高轉(zhuǎn)化效率,整個(gè)操作過(guò)程中除熱激外均要保持低溫,并且要盡量輕柔。

原創(chuàng)作者:上海語(yǔ)純生物科技有限公司

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