細胞來源：國家資源庫

l 細胞背景：從一名患有B 細胞非霍奇金淋巴瘤 (B-NHL)的43歲白人男性的腹腔積液中建立，當時被描述為彌漫性混合的小細胞和大細胞類型；細胞系攜帶 EZH2 Y641N 突變；分配給 GCB 樣 淋巴瘤亞型（生發(fā)中心 B 細胞）。EB 病毒陰性，具有 t(14；18)易位�；�因表達：單克隆細 胞質(zhì)免疫球蛋白：IgM，λ輕鏈。所有 DHL 細胞系均對 Epstein-Barr 病毒 (EBV) 基因組的 存在呈陰性。并在其可能是染色體間斷點的重鏈基因位點內(nèi)表現(xiàn)出意想不到的重組。t(14;18) 易位將截短的 bcl-2 基因與 J6 并列在尾對頭結構中。 改變的 bcl-2 基因的失調(diào)表達可能在濾泡性 B 細胞淋巴瘤的無序生長和分化中起關鍵作用。
https://www.atcc.org/Products/CRL-2959

https://www.dsmz.de/collection/catalogue/details/culture/ACC-572

l細胞特性：
1） 來源：淋巴瘤患者胸腔積液

2） 形態(tài)：圓形淋巴細胞單獨或成團懸浮生長

3） 含量：>1x106 細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。               

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）  RPMI1640培養(yǎng)基+10%FBS優(yōu)質(zhì)胎牛血清+1%P/S雙抗

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在 1×105~1×106 個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中 1000rpm，離心 5min，棄去上清，補加1-2mL 培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:5 的比例進行。

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司