細(xì)胞鑒定: STR 鑒定已通過

細(xì)胞來源 :國家資源庫

細(xì)胞背景: Chen 等人于 1982 年用一名患有胰腺癌的 62 歲女性白種人患者腹水中的細(xì)胞移植到裸鼠后建

立。可以表達(dá) CEA，人胰腺相關(guān)抗原、人胰腺特異性抗原和黏蛋白。

https://www.atcc.org/products/crl-1682

https://www.addexbio.com/productdetail?pid=5061

細(xì)胞特性 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

用途：僅供科研使用。

培養(yǎng)條件 1） 準(zhǔn)備 RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。注意事項 該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 Luc 的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其 Luc 熒光強(qiáng)度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。

建議收到細(xì)胞后至少傳 3 代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時，建議加入終濃度為 1ug/ml 嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細(xì)胞漂 浮或者漂浮較少，即可更換為含 2ug/ml 嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥 物濃度為 5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細(xì)胞大于 60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約 80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入 5ug/ml 嘌呤霉素時細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

常溫發(fā)貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置 2-3 小時后觀察密度和狀態(tài)拍照 2-3 張反饋給銷

售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例 1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成 1 個 1ml 凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存 2-3 只后才擴(kuò)增做實驗，以防突發(fā)情況引起斷種。

干冰發(fā)貨：常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管 2 只，復(fù)蘇 1 只，另外一只備用，第一個復(fù)蘇不成功時嚴(yán)格按照 廠家要求復(fù)蘇第二個，均沒有復(fù)蘇成功的情況即時留存復(fù)蘇照片通知銷售。

貼壁細(xì)胞參考：1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培養(yǎng)瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置 于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶/6cm 培養(yǎng)皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的 完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:5 的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配

制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

懸浮細(xì)胞參考：

懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般情況 下細(xì)胞密度維持在 1×105~1×106 個/mL（不同細(xì)胞對密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的正常生長。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中 1000rpm，離心 5min，棄去上清，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液 后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按 1:2~1:4 的比例進(jìn)行。

運(yùn)輸形式 低溫：（1）1mL 凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80 度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā) 現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫: （2） T25 瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

生物安全 1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)， 所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮 中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋 子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

原創(chuàng)作者：上海語純生物科技有限公司