細(xì)胞鑒定 :STR 鑒定已通過

細(xì)胞來源: 國家資源庫

l 細(xì)胞背景 建立與日本 65 歲男性患者，Y 染色體缺失。

www.jstage.jst.go.jp/article/tjem1920/156/4/156_4_319/_article

l 細(xì)胞特性 形態(tài)：圓形細(xì)胞在懸浮液中以單細(xì)胞或團(tuán)塊形式生長

用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件
1） 準(zhǔn)備：DMEM 培養(yǎng)基，優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%，雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為 70%-80%。

l 注意事項(xiàng) 該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需

要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。建議收到細(xì)胞后至少傳 3 代，一般常規(guī)

前 10 代都不需要篩選，凍存留種后再進(jìn)行篩選。初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí)，建議加入終濃度為

1ug/ml 嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含 2ug/ml

嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為 5ug/ml。若篩選過程中，漂

浮細(xì)胞大于 60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約 80%，可繼續(xù)加入同濃度

嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入 5ug/ml 嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培

養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般

情況下細(xì)胞密度維持在 1×105~1×106 個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的

正常生長。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中 1000rpm，離心 5min，棄去上清，補(bǔ)加

1-2mL 培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說明

書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按 1:2~1:5 的

比例進(jìn)行。

3）

細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前 3 代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

l 運(yùn)輸形式 低溫:

1mL 凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80 度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)

干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

常溫:

T25 瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全 1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，

所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液

氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹

掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

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