艾草网亚洲AV无码专区国产乱码久久_国产一级 片内射毛片中出91_为爱痴狂在线观看日本_隔壁放荡的人妻在线看中文_老司机午夜精品视频在线观_亚洲午夜先锋影院_亚洲国产成人精品无码区二本_美女裸体免费网站黄网_一级α爰做片免费观看_无码av孕妇专区

歡迎來到上海語純生物科技有限公司!

熱線電話:021-52273538

當(dāng)前位置:首頁 - 產(chǎn)品中心 - Nexell細胞系/株 - 人源細胞系 -A549/DDP (人肺腺癌耐順鉑株)(STR鑒定正確)

產(chǎn)品展示
PRODUCT SHOW
相關(guān)產(chǎn)品
Related products
聯(lián)系我們
contact us

聯(lián)系電話:021-52273538


公司郵箱:yuchunbio@163.com


公司地址: 上海奉賢區(qū)環(huán)城東路323號8樓

A549/DDP (人肺腺癌耐順鉑株)(STR鑒定正確)

產(chǎn)品貨號:CM0519

產(chǎn)品規(guī)格:1×10⁶cells/T25培養(yǎng)瓶

產(chǎn)品價格: ¥2580

點擊次數(shù):285

在線詢價
  • 商品詳情
  • 說明書下載
  • 相關(guān)文獻

細胞介紹

該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系,患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。A549/DDP細胞為由A549細胞構(gòu)建的耐DDP藥物細胞株.

細胞特性

1 來源:肺癌

2 形態(tài):上皮樣  多角形 貼壁生長

3 含量:>1x106  細胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

11mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在45X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。                      

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1) 準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;0.5ug/ml DDP  , 雙抗,1%。

注意:細胞復(fù)蘇過程中,不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細胞密度達約8×105/mL時,方可添加0.5ug/ml DDP 藥物;若細胞生長狀態(tài)較為緩慢,可適當(dāng)降低DDP的濃度(首次降低一半藥物濃度),或使用不含DDP 的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時,再更換為所需的DDP 濃度。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細胞處理

1 凍存細胞的復(fù)蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

注意:細胞傳代1~2次后仍能保持增殖,即可提高藥物濃度至0.5ug/mL繼續(xù)培養(yǎng);若此過程中細胞停止增殖,且狀態(tài)較差,則需降低藥物濃度(首次降低一半藥物濃度)或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約8×105/mL,且生長狀態(tài)較好時,再更換為所需的DDP藥物濃度。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

注意:細胞凍存過程中,不可添加藥物。

2. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

 

 

原創(chuàng)作者:上海語純生物科技有限公司

在線留言

您感興趣的產(chǎn)品* 您還沒有輸入您感興趣的產(chǎn)品
您的單位* 您還沒有輸入您的單位
聯(lián)系人* 您還沒有輸入聯(lián)系人
聯(lián)系電話* 您還沒有輸入聯(lián)系電話
詳細地址 您還沒有輸入詳細地址
常用郵箱* 您輸入的郵箱格式不正確
請輸入您的意見或建議* 您還沒有輸入您的意見或建議
驗證碼* 您還沒有輸入驗證碼

產(chǎn)品目錄

在線客服
業(yè)務(wù)咨詢

余先生

華南地區(qū):Tina

華北地區(qū):Tony

服務(wù)時間:8:00 - 18:00