BL21(DE3)菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7 啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如 pET 系列)的基因。λ噬菌 體 DE3 區(qū)含有 T7 噬菌體 RNA 聚合酶，該區(qū)整合于 BL21 的染色體上，所以稱(chēng)為 BL21(DE3)�？赏� 時(shí)表達(dá) T7 RNA 聚合酶和大腸桿菌 RNA 聚合酶，用于 pET 系列，pGEX，pMAL 等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。

保藏條件： -20℃保存（復(fù)溶液于 2-8℃保存）；

操作說(shuō)明：

本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌時(shí)可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液 體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降。

為保證菌種純正，避免其它細(xì)菌污染，盡量先劃平板，然后再挑單克隆菌落進(jìn)行后續(xù)操作。

冷凍管開(kāi)封：用浸過(guò) 75%酒精的脫脂棉嚴(yán)格消毒冷凍管蓋。

菌株復(fù)溶：無(wú)菌環(huán)境中旋開(kāi)裝有復(fù)溶液的滴瓶蓋，吸取 1ml 左右復(fù)溶液，加入到冷凍管中。輕輕振 蕩，使凍干菌株溶解呈懸浮狀。

菌株復(fù)壯：用無(wú)菌吸管吸取菌懸液，轉(zhuǎn)移到復(fù)溶液滴瓶中。做好標(biāo)識(shí)，在適宜溫度下培養(yǎng)。細(xì)菌 在 30-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24-48h，真菌在 23-28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24-72h（必要時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng) 時(shí)間）。

菌株傳代：將得到的菌株的新鮮培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到適宜的固體培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)基中（盡量增大接種 量：如用無(wú)菌吸管吸取≥50 μL 新鮮培養(yǎng)物至固體培養(yǎng)基，邊移動(dòng)邊緩慢釋放），適宜溫度下培養(yǎng)， 用以菌株的保藏、傳代及制備工作菌株。 注意事項(xiàng)： 1、菌種活化前，將冷凍管保存在低溫、清潔、干燥的環(huán)境中，長(zhǎng)時(shí)間室溫下放置會(huì)導(dǎo)致菌種衰退； 2、冷凍管開(kāi)封、凍干粉復(fù)溶、菌株恢復(fù)培養(yǎng)等操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行； 3、一些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，部分需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)； 4、苛養(yǎng)菌的培養(yǎng)需采用含特定營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，敬請(qǐng)正確選擇，不清楚時(shí)來(lái)電詢(xún)問(wèn)； 5、某些厭氧菌的培養(yǎng)，自開(kāi)封到接種完成，均需以無(wú)氧氣體充填，以保持厭氧狀態(tài)；培養(yǎng)過(guò)程中 亦要保持厭氧狀態(tài)； 6、某些菌種，如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌等需要 5-10% CO2 促進(jìn)生長(zhǎng)； 7、如發(fā)現(xiàn)冷凍管蓋松動(dòng)、復(fù)溶液渾濁等異常情況，應(yīng)停止使用對(duì)應(yīng)產(chǎn)品； 8、部分菌種有致病性、擴(kuò)散性，請(qǐng)專(zhuān)業(yè)人員在專(zhuān)業(yè)環(huán)境下有保護(hù)性操作。

原創(chuàng)作者：上海語(yǔ)純生物科技有限公司