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來源于 Lachnospiraceae bacterium ND2006 的 Cas12a 核酸酶(LbCas12a)是依賴于 RNA 介導(dǎo)的內(nèi) 切核酸酶,在靶標(biāo) DNA 存在 PAM 的情況下,可特異地切割靶標(biāo)雙鏈 DNA。與 Cas9 不同:(1) Cas12a 只需要單個(gè) crRNA,且體積更小、更易被遞送至細(xì)胞中;(2)Cas12a 切割后產(chǎn)生粘性末端, 更利于基因組精確編輯;(3)Cas12a 的切割位點(diǎn)遠(yuǎn)離其識(shí)別位點(diǎn),為連續(xù)多次編輯提供了可能性; (4)Cas12a 識(shí)別的 PAM 序列與 Cas9 不同,因此提供了不同編輯位點(diǎn)的選擇;針對(duì)不同的 Cas12a 蛋白,其識(shí)別靶標(biāo)所需的 PAM 位點(diǎn)不同,其中部分 LbCas12a 蛋白識(shí)別 TTTN 位點(diǎn)。本產(chǎn)品中,通 過在 LbCas12a 的 C 端融合了 NLS 核定位信號(hào),可用于細(xì)胞內(nèi)的基因編輯。
注:利用本品進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)基因編輯的實(shí)驗(yàn)過程可參考論文(https://doi.org/10.1007/s11248-019-00168-9)。
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