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 背景[1-6]

豚鼠血清經(jīng)無菌采集、批量混合，最終過3次0．1um過濾分裝而成。促細(xì)胞生長繁殖的三大指標(biāo)超過國家標(biāo)準(zhǔn)。本品適合于單抗研制、較常規(guī)的原代和傳代細(xì)胞培養(yǎng)、規(guī)�；�培養(yǎng)的疫苗生產(chǎn)。

豚鼠血清指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。

標(biāo)準(zhǔn)豚鼠血清（無菌未經(jīng)滅活）的保存應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：

(1)需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月.由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

(2)熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量.補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用,平滑肌細(xì)胞收縮,肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺,增強(qiáng)吞噬作用,促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。

(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。

(5)血清中的沉淀物絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理.顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染.一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清。

(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破會(huì)而影響血清質(zhì)量.

應(yīng)用[7][8]

用于豚鼠哮喘模型單個(gè)核細(xì)胞及嗜酸細(xì)胞與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附性的研究觀察哮喘豚鼠模型嗜酸細(xì)胞和淋巴細(xì)胞與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附率,探討肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞在哮喘模型發(fā)病中的功能變化及炎癥細(xì)胞與其粘附的分子基礎(chǔ)。方法:復(fù)制豚鼠哮喘模型;分離、培養(yǎng)和鑒定肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞;轉(zhuǎn)染核因子(NF)-κB反義寡核苷酸;分別用對照組血清和模型組血清孵育;分離外周血淋巴細(xì)胞和嗜酸細(xì)胞;采用RT-PCR法測定內(nèi)皮細(xì)胞和血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)及嗜酸細(xì)胞趨化因子(eotaxin)mRNA的表達(dá)強(qiáng)度,EMSA法測定內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB、活化蛋白(AP-1)的DNA結(jié)合活性。

結(jié)果:(1)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞在模型組血清刺激下,與兩組外周血淋巴細(xì)胞及僅與模型組嗜酸細(xì)胞的粘附率顯著升高,內(nèi)皮細(xì)胞與嗜酸細(xì)胞兩者的激活,在嗜酸細(xì)胞粘附中起明顯的協(xié)同作用;(2)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)模型組血清刺激后,VCAM-1和eotaxin mRNA表達(dá)量顯著增多,NF-κB、AP-1的DNA結(jié)合活性也顯著升高。結(jié)論:肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞可被哮喘模型血清激活,使粘附分子、趨化因子及核轉(zhuǎn)錄因子的合成和分泌增多,從而顯著提高其與炎癥細(xì)胞的粘附率,核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和AP-1對內(nèi)皮細(xì)胞合成炎癥因子可能起調(diào)控作用。淋巴細(xì)胞與嗜酸細(xì)胞的粘附機(jī)制不盡相同。

參考文獻(xiàn)

[1]Isolation,culture,and characterization of rat lung microvascular endothelial cells.Magee JC,Stone AE,Oldham KT,et al.Am J PhysiolLung Cell Mol Physiol.1994

[2]Interactions between endothelial cells and effector cells in allergic inflammation.Tonnel AB,Gosset P,Molet S,et al.Annals of the New York Academy of Sciences.1996

[3]Comparison of human eosinophil and neutrophil adhesion to endothelial cell under nonstatic conditions.Knol EF,Tackey F,Tedder TF et al.Journal of Immunology.1994

[4]The effect of inhaled sodium cromoglycate on cellular infiltration into the bronchial mucosa and the expression of adhesion molecules in asthmatics.Hoshino M,Nakamura Y.European Respiratory Journal.1997

[5]Association of asthma with serum IgE level and skin-test reactivity to allergens.Burrows B,Martinez FD,Halonen M,et al.The New England Journal of Medicine.1989

[6]Regulation of the development of type 2 T helper cells in allergy.Romagnani S.Current Opinion in Immunology.1994

[7]Th2 and Th2-like cells in allergy and asthma:Pharmacological perspectives.Anderson GP,Coyle AJ.Trends in Pharmacological Sciences.1994

[8]曾澤戎,崔德健,紀(jì)曉峰.豚鼠哮喘模型單個(gè)核細(xì)胞及嗜酸細(xì)胞與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附性的研究[J].感染.炎癥.修復(fù),2001(03):165-169.