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K599感受態(tài)(電轉(zhuǎn))

產(chǎn)品貨號:EC96315

產(chǎn)品規(guī)格:10 ×50ul/100×50ul

產(chǎn)品價格: ¥ 電議

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標簽:感受態(tài) 
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產(chǎn)品簡介
發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細菌,它能夠
感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。K599 發(fā)根農(nóng)桿菌(NCPPB2659)含
pRi2659 農(nóng)桿堿型 Ri 質(zhì)粒,具有廣泛的宿主范圍(葫蘆科,豆科,茄科等),同時具有鏈霉素
抗性。本公司生產(chǎn)的 K599 化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,pCAMBIA2301
質(zhì)粒(卡那霉素
抗性)檢測,轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
K599
電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
10 ×50 μL
100 ×50μL
定制
基因型:Agrobacterium rhizogenes (StrR ) pRi2659 (agropine type)
存儲條件
-80 ℃保存; 請勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除農(nóng)桿堿型 Ri 質(zhì)粒 pRi2659 外,無外源質(zhì)粒 DNA 殘留
電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 將新的 2 mm 電擊杯插入冰中預(yù)冷;或者將儲存于 75%乙醇中的 2 mm 電擊杯和杯蓋取出,在超凈工
作臺中將其倒置于干凈的吸水紙上,使乙醇充分揮發(fā),然后插入冰中預(yù)冷;
2. -80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中待其融化,加入 0.01-1μg 質(zhì)粒 DNA(體積不大于 5μl),用
200μl 槍頭將感受態(tài)-質(zhì);旌衔锟焖俎D(zhuǎn)移到預(yù)冷的電擊杯中,蓋上杯蓋;
3. 開啟電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù)(2500V ,200Ω,25μF),將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成后快速插
入冰中,加入 900μl 無抗生素的 YEB 并將感受態(tài)細胞轉(zhuǎn)移到無菌空管中,28 ℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時。
(注:此電轉(zhuǎn)化參數(shù)為 Bio-rad 推薦,使用者也可使用電轉(zhuǎn)儀所推薦的 Protocol 進行操作)
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100μl 左右上清將菌體輕輕吹勻,并涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB
板 上,倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2~3 天。
注意事項
1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的 1/10
2. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞中不可混入氣泡,轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?上鄳(yīng)減少最終用于涂板的菌量;
3. 平板上陽性克隆密度不宜過大,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量或最終用于涂板的菌量;
4. K599 具有鏈霉素抗性,不可用于具有鏈霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化

原創(chuàng)作者:上海語純生物科技有限公司

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